时间: 2025-08-06 09:50:27 来源: boldnova.fastseoul.com 作者: 美食之旅
鱼腥草芩蓝合剂为常见中药制剂,高效由鱼腥草、液相黄芩、色谱时测板蓝根、法同连翘、定鱼金银花5味中药材配制而成,腥草具有清热解毒的芩蓝作用,临床常用于治疗外感风热引起的合剂咽喉肿痛,急性咽炎、中种扁桃体炎等疾病。成分现代药理研究表明,高效该制剂具有良好的液相解热作用,临床治疗小儿疱疹性咽峡炎有较好的色谱时测疗效。鱼腥草芩蓝合剂收录于国家药品监督管理局国家中成药标准中,法同然而现行标准中只有鱼腥草、定鱼黄芩、连翘和金银花的薄层色谱鉴别项和黄芩苷含量的测定项,不能全面地反映复方制剂的内在质量。目前有关该制剂组分含量的测定研究较少,邓茂芳等建立了高效液相色谱(HPLC)法同时测定鱼腥草芩蓝合剂中绿原酸、黄芩苷和黄芩素含量的方法。鱼腥草芩蓝口服液是同方配制的兽药制剂,陆安等以鱼腥草芩蓝口服液为研究对象,建立了HPLC指纹图谱鉴别方法,但未进行含量测定研究;邢玉娟等建立了HPLC法测定鱼腥草芩蓝口服液中黄芩苷和绿原酸含量的方法。鱼腥草中含有绿原酸、槲皮素、槲皮苷等化学成分;黄芩中含有黄芩苷、汉黄芩素和汉黄芩苷等成分;连翘中含有绿原酸、槲皮素、槲皮苷、连翘酯苷A等成分;金银花中含有绿原酸、槲皮素和槲皮苷等成分。笔者在前人研究的基础上,对试验条件进行优化,建立了HPLC法同时测定鱼腥草芩蓝合剂中绿原酸、连翘酯苷A、黄芩苷、槲皮苷、汉黄芩苷、槲皮素和汉黄芩素7种成分含量的方法,为全面控制该制剂的质量提供参考。
高效液相色谱仪:UltimateU3000型,配有Chromeleon7.2SR5色谱工作站、真空脱气机、自动进样器、柱温箱和二极管阵列检测器,赛默飞世尔科技(中国)有限公司。电子天平:XPE205型,感量为0.01mg,瑞士梅特勒–托利多公司。超声波提取器:ELMASONICP型,德国艾尔玛公司。纯水仪:MilliPAKadvantageA10型,美国密理博公司。复方鱼腥草合剂样品:某生产企业样品。绿原酸、连翘酯苷A、黄芩苷、槲皮苷、汉黄芩苷、槲皮素、汉黄芩素对照品:批号分别为18071907、A19011704、18041002、19091104、18032111、19082203、18030509,纯度(质量分数)分别为96.1%、97.2%、93.3%、100.0%、98.5%、98.8%、99.1%,成都普菲德生物技术有限公司。乙腈、甲醇:均为色谱纯,美国赛默飞世尔公司。磷酸,分析纯,国药集团化学试剂(北京)有限公司。实验用水为超纯水。
对照品单标储备液:分别精密称取绿原酸、连翘酯苷A、黄芩苷、槲皮苷、汉黄芩苷、槲皮素和汉黄芩素对照品各约10mg,其中黄芩苷置于10mL容量瓶中,其它6种化合物分别置于100mL容量瓶中,各加入50%甲醇溶液溶解,稀释,定容至标线,配制成绿原酸、连翘酯苷A、黄芩苷、槲皮苷、汉黄芩苷、槲皮素和汉黄芩素的质量浓度分别为98.5、102.4、994、97.8、101.2、98.8、103.2μg/mL的单标储备液。
混合对照品溶液:分别精密量取上述对照品单标储备液各1mL,置于同一只10mL容量瓶中,加入50%甲醇溶液稀释并定容至标线,摇匀,配制成绿原酸、连翘酯苷A、黄芩苷、槲皮苷、汉黄芩苷、槲皮素、汉黄芩素的质量浓度分别为9.85、10.24、99.4、9.78、10.12、9.88、10.32μg/mL的混合对照品溶液。
精密量取鱼腥草芩蓝合剂2mL,置于20mL棕色容量瓶中,加入50%甲醇溶液12mL,超声20min,冷却至室温,用50%甲醇溶液稀释至标线,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液,待测。
色谱柱:SymmetryShieldRP18柱(4.6mm×250mm,5μm,美国沃特世公司);流动相:乙腈–0.1%甲酸溶液;洗脱方式:梯度洗脱;洗脱程序:初始乙腈体积分数为20%,0~30min,乙腈由20%逐渐增加至40%,保持30min,60~80min,乙腈由40%逐渐增加至80%;流量:1.0mL/min;检测波长:210nm;柱温:30℃;进样体积:5μL。
所测7种化合物中,绿原酸为咖啡酰奎宁酸类,紫外光谱最大吸收峰为327nm;连翘酯苷A为苯乙醇苷类,最大吸收为330nm;其余成分为黄酮或黄酮苷类,黄芩苷最大吸收波长为278nm,槲皮苷为254nm和350nm,汉黄芩苷为276nm,槲皮素为370nm,汉黄芩素为276nm。各成分之间紫外最大吸收波长差别较大,但在210nm处均有较强的紫外吸收,故选择210nm作为检测波长同时检测7种成分。
分别选择乙腈–水溶液、乙腈–0.1%甲酸溶液和乙腈–0.1%磷酸溶液作为流动相,考察不同流动相体系对7种待测成分的分离效果。结果表明,乙腈–0.1%磷酸溶液作为流动相时,色谱峰形较好,故选择乙腈–0.1%磷酸溶液为流动相。由于7种待测化合物极性跨度较大,采用等度洗脱无法对所有化合物进行分离,故采用梯度洗脱方式。对梯度洗脱程序进行优化,最终确定洗脱程序:初始乙腈体积分数为20%,0~30min,乙腈由20%逐渐增加至40%,保持30min,60~80min,乙腈由40%逐渐增加至80%。在此洗脱程序下,7种化合物在80min内获得较好的分离,峰形较好。
分别对SymmetryShieldRP18柱(4.6mm×250mm,5μm)、AgilentZORBAXEclipseXDB柱(250×4.6mm,5μm)和ODSHHPERSIL柱(4.6mm×250mm,5μm)3种型号的色谱柱进行考察,结果发现,SymmetryShieldRP18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱分离效果最佳,故选择该色谱柱进行方法学考察和样品测定。
样品为口服液体制剂,溶解性较好,但个别化合物浓度较高,故采用50%甲醇对样品制剂稀释10倍,过滤后直接进样测定。混合对照品溶液和样品溶液色谱图如图1所示。
相关链接:绿原酸,连翘酯苷A,汉黄芩苷,槲皮素
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